علی آبرومند
Contact me
My Profile
Blog Author(s) علی آبرومند
Previous Months Home Archive اسفند ۸٩ More ...
      علوم غذایی ()
جزوه میکروبیولوژی عملی by: علی آبرومند

 

 

جزوه آزمایشگاه میکروبیولوژی

 

تآلیف: دکتر علی آبرومند

 

 

گروه شیلات

 

مجتمع آموزش عالی بهبهان

 

 

سال تحصیلی 90-89

 

 

 

 

 

 

 

 

مقررات کلی آزمایشگاه میکروبیولوژی:

به پیشنهاد هایی که در زیر است کاملا توجه کنید:

1.      لباسهای خود را روی میز آزمایشگاه نگذارید.

2.      روپوش خود را همیشه تمیز نگه دارید.

3.  مداد و قلم و اشیاء دیگر و دست خود را هرگز به دهان خود نزنید.

4.      با ظروف آزمایشگاه آب نخورید.

5.      میز کار خود را قبل و بعد از آزمایشگاه پاک کنید.

6.      در موقع استفاده از میکروسکوپ دقت کافی به عمل آورید.

7.  سوزن پلاتین را که برای کشت و برداشت باکتری ها از آن استفاده میکنید قبل و بعد از برداشت روی شعله سترون نمائید(سیم باید کاملاً سرخ شود).

8.      اگر از کشت باکتری روی لباس یا میز کار خود ریختید فوراً مسئول آزمایشگاه را آگاه سازید.

9.  مواد زائد مانند کاغذ، پنبه، چوب کبریت و غیره را در سطل مخصوص ریخته و محیط کشتهای استفاده شده را در سبدهای مخصوص در مجاور اتوکلاو قرار دهید که بعداً استرلیزه شوند.

10.    پس از خاتمه کار و تمیز نمودن میکروسکوپ و میز کار دست خود را با صابون بشوئید.

11.    محیط کشتهای خود را همیشه نامگذاری نمائید.

12.    از کار هر جلسه یادداشت و مطالب لازم تهیه کنید.

 

 

 

آزمایش اول

 

مطالعه میکروسکوپی یونجه خیسانده و موجودات ذره بینی

 

محیط آزمایشگاه

 

موجودات ذره بینی در طبیعت بر روی مواد و محیطهای مختلف به سر می برند. وجود آنها را می توان با مطالعه میکروسکوپی یونجه خیسانده شده نشان داد. مقدار یونجه خشک را که از اصطبل برداشته شده با آب حوض در یک ظرف سربازخیس می کنیم و پس از مخلوط کردن به مدت یک هفته در جای آرام قرار می دهیم. برای مشاهده وجود میکروبها در یونجه خیسانده آن را به طریق قطره معلق مطالعه می کنیم و بعد برای مشخص کردن ساختمان و شکل، آنها را رنگ آمیزی می کنیم.

منظور از این آزمایش مطالعه شکل ، اندازه، طرز قرار گرفتن و حرکت میکروبهای موجود درطبیعت می باشد.

موادلازم:

یونجه خیسانده، لام، لامل، پیپت یک سانتیمتر مکعب، میکروسکوپ، کریستال دیوله.

 

طرز کار:

1-   مطالعه میکروارگانیزمها به حالت تازه:

ابتدا لام را به وسیله پارچه تمیز پاک کرده و آن را در الکل 90 درجه می شوئیم (در داخل الکل قرار داده و بعد خشک می کنیم) بعد از خشک شدن کامل لام آن را در جلوی شعله قرار داده و سپس به کمک پیپت یک قطره از مایع خیسانده را برداشت نموده و روی لام قرار دهید. لام را در زیر میکروسکوپ قرار دهید و ابتدا با ابژکتیف ضعیف و بعد ابژکتیف قوی آن را مطالعه کنید.

باکتری ها، پروتوزئرها، مخمرها، کپکها، اگلها را می توان در این قطره مشاهده کرد.

اشکال هر یک از میکروبها را با در نظر گرفتن اندازه نسبی آنها رسم نمائید.

2-   مطالعه میکروارگانیزمها بعد از رنگ آمیزی:

 

دستورالعمل:

1-    پخش کردن: یک قطره از محیط  آبکی را روی لام پخش کنید به ترتیبی که بصورت یک لایه بسیار نازک درآید.

2-    خشک کردن: بدون حرارت دادن لام آن را در حرارت آزمایشگاه خشک کنید.

3-     ثابت کردن: بعد از خشک شدن لام آنها را ثابت کنید در این مرحله میکروارگانیزمها کشته شده و روی لام ثابت میشوند. ثابت کردن باعث انعقاد مواد آلبومین می گردد که به دو طریق زیر امکان پذیر است:

الف) به وسیله حرارت: لام را سه مرتبه از جلوی شعله رد نمائید.

ب) به وسیله الکل90 درجه: چند قطره الکل بر روی نمونه  ریخته و آن را سه مرتبه در جلوی شعله بگذارید و هر بار  پس از خاموش کردن شعله الکل عمل را تکرار کنید ( در این آزمایش بهتر است به طریق الف عمل کنید)

4-  رنگ آمیزی ساده : چند قطره محلول کریستال ویولت را روی لام ریخته و بعد از 30 ثانیه آنرا چند بار توسط آب بشوئید و در زیر میکروسکوپ بدون لامل و با روغن سدر مطالعه کنید.


 

طرز کار با اتوکلاو

 

1)  شیر قیف آب را باز نموده و در داخل آن آب میریزیم تا حدود آب در سطح فوقانی شیشه نمایان شود سپس شیر آب را میبندیم.

2)       پس از گذاشتن لوازم در اتاقک استریزاسیون و بستن در اتوکلاو بوسیله 3 کلید دستگاه را روشن می کنیم.

3)  دستگاه دارای 3 شیر در قسمت قوفانی میباشد که 2 شیر ان در جلو و 1 شیر آن درعقب، 2شیر جلویی را بسته و شیر عقبی را باز میکنیم (شیر تخلیه عقبی برای خارج کردن هوای موجود در دیگ بخار است).

4)       در جلوی اتوکلاو 2 دستگاه فشارسنج دیده میشود، شماره 1و شماره2 ؛ پس از اینکه از سوپاپ اطمینان بخار خارج شد روی فشارسنج شماره 1 نگاه میکنیم وقتی عقربه دستگاه به شماره 1.5 که با قرمز نوشته شده است رسید نشان دهنده تخلیه کامل اتوکلاو از هوا میباشد.

5)  بعد از اینکه عقربه فشارسنج شماره 1 به 1.5 رسید شیر تخلیه عقبی را میبندیم و شیر اتاقک درونی را باز میکنیم.

6)  سپس عقربه شماره 2 بالا میرود تا به 1.5 برسد بعد از اینکه هر دو عقربه دستگاه به 1.5 رسیدند مدت زمان لازم ( با در نظر گرفتن فشار و حرارت با استفاده از دماسنج موجود در جلوی دستگاه) برای استریل کردن را در نظر میگیریم و دستگاه را به همان حالت میگذاریم البته چنانچه عقربه ها از 1.5 بیشتر شد یکی از 3 کلید دستگاه را خاموش میکنیم در صورتیکه باز هم عقربه از 1.5 بیشتر شد 2 کلید دستگاه را خاموش میکنیم.

7)  پس از پایان یافتن مدت زمان لازم 3 کلید را خاموش میکنیم.

8)  2 شیر بسته تخلیه بخار را یعنی یکی در جلو و دیگری در عقب است باز میکنیم و منتظر خواهیم ماند تا اینکه عقربه های فشارسنج به صفر برگردند در اینصورت دستگاه سرد شده و میتوان در را باز کرد.

 

آزمایش آب

آب  یک ماده حیاتی است و برای تمام موجودات زنده ( انسان- حیوان و گیاه ) مورد نیاز است بنابراین کنترل آن از نظر بهداشتی حائز اهمیت است بطوریکه در کشورهای پیشرفته در رأس تمام مسائل بهداشتی، مسئله آب است .

تعریف آب : آب مایع زلال ، شفاف ، بی رنگ و بی طعم و عادی از میکروبهای پاتوژن و مواد شیمیایی مضر است . در اینجا فقط راجع به آزمایش باکتریولوژیکی آب بحث می شود .

آب مورد استفاده یا آب های سطحی (رودخانه) یا آبهای عمقی یا آب ساکن هستند آب مصرفی یا بوسیله  فاضلاب منازل یا فاضلاب  کارخانه آلوده می شود  و از نظر باکتریولوژیکی به دنبال میکروب بیماری حصبه، شبه حصبه و وبا نمی گردیم و به دنبال کل فرم می گردیم .

تعریف کل فرم : کل فرم ها  باکتریهای باسیل شکل کرم منفی هستند که قند لاکتوز را تخمیر می کنند و ایجاد اسید و گاز می کنند چرا به دنبال کلینوم ها می گردیم چون اولا تعداد آنها کم است و بندرت در نمونه های 250-200 سی سی یافت می شوند و دوم اینکه وقتی به آزما یشگاه  منتقل می شود از بین می رود و چون کلبنوم ها بطو طبیعی در دستگاه هاضمه انسان و حیوان است و وجودآنها در آب نشانگر آلودگی آب بوسیله فاضلاب است.

از بین کلیفرم ها دو تا معروفند:1- .coli.E          2-Enterobacter aerogenes

در ازمایش باکتریولوژیکی آب از دو روش  9 لوله ای استفاده می شود که از محیط کشت Lactose Broth  (آب گوشت گاوی قند لا کتوز ) استفاده می شود که با دورقت تهیه می شود رقت ضعیف و رقت قوی . در رقت ضعیف13 گرم از محیط کشت در یک لیتر آب مقطر حل می کنیم ودر رقت قوی 26 گرم در یک لیتر آب مقطر حل میکنیم .

لوله آزمایش درهام لوله ای کوچک  است بخاطر اینکه اگر گاز تولید شود بتوان دید.

لاکتو براث ضعیف را 10 سی سی  در لوله ای آزمایش درهام می ریزیم ولی لاکتوپراث قوی 20 سی سی تقسیم می کنیم سپس در درجه حرارت  121 درجه سانتی گرادو فشار psi 15 به مدت ربع ساعت در اتوکلاو می بریم

از 9 لوله آزمایش 6تا لاکتوبرث ضعیف و 3تا لاکتو براث قوی دارد در 3لوله حاوی لاکتو براث قوی  cc 10از آب مورد آزمایش، در 3تای بعدی 1.0 سی سی از آب مورد آزمایش و در 3تای بعدی هر کدام ml 1 از آب مورد آزمایش می ریزیم.

روش 9 لوله ای در 3 مرحله صورت می گیرد:

1- مرحله احتمال (گفته شد).

2- مرحله تأییدی که مرحله احتمال را تأیید می کند.

 3- مرحله تکمیلی .

مرحله احتمالی که با 9 لوله انجام می شود به صورت زیر است:

لوله های حاوی آب به مدت 24-48 ساعت می گذاریم در اتوی 37 درجه سانتی گراد و باید از 48 ساعت بیشتر نشود چون ممکن است یکسری دیگر از باکتریها مثل کلیسیلا( در دستگاه تنفسی زندگی می کند) لاکتوز را تجزیه کند و مثل کلیفرم رشد کند.

روش نمونه برداری:

 اگر نمونه آب را از لوله آب شرب بگیریم باید از شیشه های 200 و 250 سی سی درب دار استفاده شود. این بطری ها باید قبلاً استریل باشند. آب اگر حاوی کلر باقی مانده باشد برای خنثی شدن کلر باقیمانده در آب به آن تیو سولفات سدیم قبل از استریل شدن بطری(شیشه ای) می زنند چون اگر باکتری در آب باشد کلر آنرا از بین می برد.

طرز نمونه گیری آب از لوله:

اول با پنس و پنبه دهانه لوله را آتش می زنیم تا استریل شود و آب باید بمدت 4-5 دقیقه جریان یابد و سپس باید در مجاورت شعله از آب نمونه گیری شود تا آلودگی ثانویه وجود نداشته باشد. اگر از رودخانه باید نمونه گیری کنیم بطری را به عمق 10 سانتی متری زیر آب در جهت عکس جریان آب قرار داده پر می کنیم و اگر از آب ساکنی باید نمونه برداری کنیم این جریان را با حرکت شیشه یا بطری ایجاد می کنیم.

 چون آب محیط خوبی برای میکروبها نیست و تعداد آنها در آب کم است نمونه آب باید در مجاورت یخ به آزمایشگاه منتقل شود.

تعداد مجاز کلیفرم بصورت استاندارد تا 10 تا در آب مجاز است و تعداد E.coli  در 100سی سی آب باید صفر باشد.

جدول MPN برای شمارش باکتریها:

آب در 3 مرحله آزمایش، بررسی می شود مرحله اول از روش احتمالیPresumptive   که در این روش احتمالی تعداد کلینیوم ها را بدست می آوریم. مرحله دوم بنام قسمت تأییدی confirmatory test  که تأیید می کند باکتری ها کلیفرم هستند یا چیز دیگری هستند و تأیید می کندکه E.coli نباشد.

مرحله سوم مرحله تکمیلیcomplementary test است. اگر تعداد کلیفرم ها از حد مجاز کمتر بود از مرحله تکمیلی استفاده می شود.

 تست شمارش احتمالی یا Most  Probable  Number:

که در روش جدول MPN دقیقاً روش اندازه گیری کلنیوم هاست ولی در این جا بهترین احتمال که تعداد کلنیوم ها را بدست آوریم روش 9 لوله ای است.

 

 

 

 

 

 

 

 

گزارش کار شامل:

1-گزارش کار حاوی نام آزمایش و هدف آن تشخیص تعداد کلیفرم ها و تشخیصE.coli اگر باشد

2-مقدمه:از رفرانس استفاده شود.

3-وسایل و مواد مورد نیاز :لاکتو براث قوی و ضعیف لوله درهام- آب- پیپت- اندیکاتور

4- روش کار

5- نتیجه گیری: در آب چند تا کلیفرم است اگر مشاهده شد.46 تا کلیفرم است اب قابل شرب نیست چون بیش از حد مجاز است.

6- تفسیر نتیجه گیری که آلودگی آب چگونه ایجاد می شود و یا باید کلریزه شود.

سؤال: چرا آب قبل از رسیدن به آزمایشگاه بایدبه مدت4 ساعت در مجاورت یخ باشد؟

چون تعداد میکروب ها زیاد می شوند فعالیت آنها بیشتر می شود و نمی میرند زیرا آب محیط مناسبی برای رشد نیست.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

آزمایش دوم:

تست تأییدی(کار قبل را تأیید می کند)

بوسیله یک پیپت معمولی استریل از لوله ای که حاوی گاز است( جواب مثبت است) چند قطره آب در مجاورت شعله بر می داریم و در داخل لوله ای که حاوی محیط کشت Brilliant Green lactose Bill Broth  (محیط آب گوشت صفرا دار سبز رنگ ) می ریزیم و بعد بمدت 48 ساعت درآون(incubator ) 37 درجه سانتی گراد قرار می دهیم و نتیجه را می خوانیم اگر در لوله گاز تولید شد پس کلی فرم وجود داشت و آزمایش قبلی را تأیید می کند.

چرا از این محیط کشت یا Brilliant Green Lactose Bile Broth   استفاده می شود چون اینها محیط کشت انتخابی Selective media  بوده و در این محیط کشتهای انتخابی یک یا دو یا چند ماده به عنوان inhibitor  اضافه می شود که یکی ازاین مواد نمک صفرا است که باعث جلوگیری از رشد بعضی میکروارگانیزم ها می شود و بر روی بقیه ی میکروبها اثری ندارد. این محیط کشت نمک صفرا دارد که باعث جلوگیری از رشد بعضی از میکروبها غیر از کلی فرم ها که گاز تولید می کند، می گردد.محیط کشت دیگرAgar Macconkey است چون نمک صفرا دارد باعث می شود که غیر از کلنیوم ها میکروبها ی دیگر نتواند رشد کند پس Selective media  است.

نمک صفرا باعث می شود گاهی اوقات باکتریهای گرم منفی روده ای مثل سالمونلا و E.coli تشخیص بدهیم.

محیط کشت تشخیص دهندهDifferential media             :

دلیل استفاده :

در این روش محیط کشت میکروبها با کلنی هایی که ایجاد می کند از روی رنگ کلنی می فهمیم که چه نوع میکروبی است.E.coli  روی  Maeccomkey Agar رنگ قرمز تولید می کند و چون E.coli   جزو کلیفرم هاست و کلنیوم ها لاکتوز تخمیر می کنند و این محیط کشت  Maeccomkey Agar  لاکتوز دارد که در اثر مصرف توسطM.o.  تولید اسید می کند و اسید ایجاد رنگ قرمز می کند پس این محیط کشت M.Agar چون قند لاکتوز دارد پس محیط کشت افتراقی است( تشخیص دهنده) ولی سالمونلا قند لاکتوز را تخمیر نمی کند پس کلنی های ان بی رنگ هستند و این راه تشخیص سالمونلا و E.coli   است.

آب شرب مصرفی ویژگیهایی دارد که شامل:1- تعداد کلیفرم های آن از 10 تا در 10 سی سی تجاوز نکند پس باید تعداد کلیفرم ها راشمارش کنیم بشرطی که E.coli آن از یکی بیشتر نباشد پس باید E.coli  را نیز تشخیص داد.

در گوشت مرغ یخ زده جمع کل باکتریها در هر گرم از 107 بیشتر نباشد بشرطی که در 25 گرم گوشت مرغ بیشتر از یک عدد سالمونلا وجود نداشته باشد. پس کنترل میکروبی مواد غذایی اهمیت دارد.

چرا از incubator (آون-اتو) در آزمایشگاهها استفاده می کنیم؟

چون رشد اغلب میکروبها در 37 درجه سانتی گراد بخوبی صورت می گیرد و برای قارچها ومخمرها28 درجه سانتی گراد مناسب است

 چراازاتوکلاو در آزمایشگاه استفاده می کنیم  ؟

چون لوله ها و پیپت ها و وسایل را باید استریل کنیم با درجه  121 سانتی گراد به مدت حداکثر یک ساعت در فشارPsi 15استفاده می شود.

طرز بدست آوردن محیط کشت ها:

محیط کشت های مصرفی دو نوعند:

1- Agar

2- Bruth

طرز ساختن محیط کشت آگار:

این محیط کشت در درجه حرارت معمولی بسته می شود و حالت ژله ای پیدا می کند. این محیط کشت در همه آزمایشهای میکروبیولوژی بکار می رود. برای شمارش کل باکتریها در پتری دیشها یا پلتها بکار می رود.

طرز ساختن:

5/23 گرم از پودر Plat count Agar  دقیقاً وزن کرده و بعد وارد ارلن کرده و بعد1000 سی سی آب مقطر اضافه می کنیم و آنرا بهم می زنیم تا هموژن شود و حل شود پس ارلن را روی اجاق برقی دارای همزن مغناطیسی که مایع بچرخد، به جوش می آوریم پس از جوشیدن مایع، آنرا از روی اجاق برداشته و ارلن را در اتوکلاو می گذاریم که در 121 درجه سانتی گراد به مدت 15 دقیقه و فشار Psi15 استریل می کنیم. قبل از ورود ظرف ارلنی به اتوکلاو و پس از جوشاندن، روی آن را با پارچه پوشانده و بعد با آلومنیوم می پوشانیم تا در اثر افزایش حرارت جوش نخورد و یا بالا نیاید و هم کاملاً استریل شود(و هم بخار آب نفوذ نکند).

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

آزمایش سوم: رنگ آمیزی گرم استافیلوکوکوس( سواپ بینی)

یک قطره آب بینی یا دهان  در یک قطره آب روی لام به صورت یک لایه نازک در می آوریم لام را در هوا خشک می کنیم و بعد برای Fix کردن( ثابت کردن) لکه، لام را روی شعله عبور می دهیم به طوریکه لام روی پشت دست نسوزد. بعد لام رادر رنگ کریستال ویولت می گذلریم به مدت 30 ثانیه تا یک دقیقه نگه می داریم و بعد با جریان آب معمولی شستشو داده( 1دقیقه) و بعد محلول لوگل به مدت یک دقیقه می ریزیم و نگه می داریم..

لوگل برای ثابت کردن کریستال ویولت روی غشاء سلولی است. بعد با جریان آب شستشو داده بعد 20 ثانیه الکل 96% می ریزیم بعد محلول سافرانین یا فوشین می ریزیم. باکتری گرم مثبت در غشاء آن چربی وجود ندارد یا کریستال ویولت رنگ بنفش به خود می گیرد ولی باکتری گرم منفی چون در غشاء چربی دارد در نتیجه رنگ سافرانین( قرمز رنگ) به خود می گیرد.

چون غشاء گرم مثبت چربی ندارد الکل آن را زایل می کند و با کریستال ویولت رنگ بنفش به خود می گیرد.

تمام باکتریهای کوکسی ها گرم مثبت هستند.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

آزمایش چهارم: شمارش کل باکتری ها در مواد غذاییTotal count

تعداد کل میکروبها در ماده غذایی در هر گرم یا هرCC(میلی لیتر) چقدر است چون هر ماده غذایی از نظر توتال کیفیت یک استاندارد دارد. فرضاً توتال کنت در مرغ یا گوشت یخ زده نباید از 107 باکتری در هر گرم بیشتر باشد. حداکثر تا اینقدر مجاز است.

بهترین روش برای شمارش کل باکتری ها در ماده غذایی( توتال کنت)Pour Plate

استکه به نام Tryptone glucose yeast extraet Agar ( تریپتون گلوکز یست اکسترکت آگار) که یک نام دیگر به نامStandard  methods Agar (SMA) معروف است.

می خواهیم بدانیم در همبرگر پخته نشده، سرخ کرده ، گوشت مرغ، شیر خشک ئعداد کل باکتری در هر گرم چقدر است.

روش برای همه آنها یکی است و صادق است.

در مورد روش گوشت مرغ:

10 گرم گوشت مرغ به 90 سی سی  سرم فیزیولوژی اضافه می شود و در بلندر Blender مخلوط کن ماده یکنواخت بدست می آوریم رقت حاصله 10/1 است. از رقت 10/1، یک میلی لیتر بر می داریم و در پلیت محتوی 9 سی سی سرم فیزیولوژی می ریزیم رقت 10/1 بدست می آید. از رقت 100/1 حاصله 1 سی سی بر می داریم و در لوله( پلیت) حاوی 9 سی سی سرم می ریزیم رقت 1000/1 و همینطور بعد رقت 10000/1 و بعد رقت 100000/1 و  1000000/1  بدست می آوریم.

 بعد از هر کدام یک از رقتهای حاصله، جداگانه یک CC بر می داریم و در پلیت خالی می ریزیم و بعد 20-25 سی سی اگار 45-50 درجه قبل از بسته شدن یا ژله ای شدن روی هر پلیت می ریزیم تا سطح پلیت را بپوشاند و بعد حرکت زیگزاگی به پلیت ها می دهیم یعنی 3 دفعه به طرف راست می چرخانیم و 3 دفعه به طرف چپ و 3 دفعه به طرف وسط حرکت می دهیم تا خوب نمونه در قسمت تحتانی پلیت پخش شود بعد وقتی پلت ها بسته شد در انکوباتور می گذاریم و بعد از 48-24 ساعت بیرون آورده و شمارش کلنی می کنیم.

 اگر 5 کلنی در رقت 10/1 باشد یعنی 50 کلنی در هر گرم ماده غذایی وجود دارد پلیت هایی که حاوی حداکثر 300 کلنی هستند شمرده می شوند.

اگر در رقت 10/1، 50 تا کلنی باشد در پلیت با رقت 100/1 باید 5 تا کلنی باشد و در رقت100/1 باید5/0 کلنی باید باشد یعنی هیچ کلنی نیست و شمارش نمی شود زیرا در هرسه رقت اگر حساب شود که در یک گرم یا یک سی سی نمونه چقدر کلنی است اینطور حساب می شود.

در رقت 10/1 ________   500=10× 50

در رقت100/1_______   500=100× 5

در رقت 1000/1_______500=1000× 5/0

اگر تعداد کلنی ها در پلیت ها به هم نزدیک باشد اشکال ندارد و اگر از هم فاصله زیاد داشته باشند باید معدل حساب کنیم تا خطا کمتر باشد( بهترین شمارش کلنی ها40-18) مثلاً اگر 50 تا کلنی در رقت 10/1 باشد و 15 تا کلنی در رقت 100/1 باشد اینطور حساب می شود و معدل گیری می شود.

500=10×50

1500=100×15

2250=2÷4500=1500+500

حد متوسط آنها (تعداد کلنی )

 

 

 

 

 

 

 

 

 

آزمایش پنجم: طریقه شمارش کلیفرم ها در مواد غذایی( شیر):

برای شمارش کلنیوم ها از ماده ای به نام Maccon Key Agar استفاده می شود برای این کار 3 پلیت که هر کدام حاوی cc9 سرم فیزیولوژی است در نظر می گیریم. یک سی سی از شیر به پلیت حاوی cc9 سرم فیزیولوژیک می ریزیم تا رقت 10/1 بدست آید و بعد cc1 از رقت100/1 بر می داریم و به پلت حاوی cc1 سرم می ریزیم تا رقت 1000/1 بدست آید . بعد cc1 از رقت 10/1 و cc1 از رقت100/1 cc,1 از رقت 1000/1 جداگانه در 3 پلیت یا پتری دیش می ریزیم بعد روی هر کدام از پلیتها یا پتری دیش ها آگار  Maccon key ریخته و حرکت زیگزاگی و دورانی داده تا آگار بسته شود و بعد یک قشری از آگار روی هر کدام می ریزیم تا سطح پلیت ها را بپوشاند برای اینکه از آلودگی ثانویه جلوگیری شود وقتی آگارها بسته شددر انکوباتور 37 درجه به مدت 24 ساعت می گذاریم. کلنی های قرمز و صورتی کلیفرم ها هستند و اگر سالمونلا باشد بیرنگ است.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

  Comments ()
Recent Posts جزوه میکروبیولوژی عملی جزوه میکروبیولوژی جزوه میکروبیولوژی جزوه فراوری شیلات مقالات چاپ شده رزومه علمی آموزشی دکتر علی آبرومند به پرشین بلاگ خوش آمدید
My Tags  
My Friends   باشگاه مدیران و متخصصان My Pardis